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viernes, 1 de agosto de 2008

Transferencia de DNA a membranas

Bueno primero que nada disculparme ante mis lectores por la ausencia de entradas durante estos días, pero hay una serie de acontecimientos que no me permiten atender el blog tan bien como quisiese.

 

En muchas investigaciones en Biología Molecular se utiliza la hibridación de DNA o de RNA para averiguar qué genes se expresan ante determinadas condiciones fisiológicas.

 

¿Pero cómo se consigue esto? Una de las opciones es utilizar un método de transferencia a membrana o Southern ( en el caso de DNA). Se extrae el DNA del organismo, se trata con enzimas de restricción y posteriormente se corre en un gel de agarosa. Una vez tratado con enzimas de restricción el DNA ha quedado cortado y separado por fragmentos en el gel. Pero una vez tenemos el DNA cortado necesitamos un soporte en dónde realizar la hibridación con el DNA de interés para saber si está presente en el genoma del organismo o no.

 

Este soporte es una membrana de nitrocelulosa, y la transferencia es mucho más sencilla de lo que parece. Se coloca la membrana encima del gel y por debajo del gel un tampón salino. Encima de la membrana de nitrocelulosa se coloca papel absorvente. El tampón va a ascender hacia el papel absorvente y va a arrastrar el DNA desde el gel hasta la membrana en que quedará retenido en la misma posición que en el gel. Una vez tenemos el DNA en este soporte ya podemos seguir con los experimentos que necesitemos.

 

southern-blot

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