miércoles, 30 de septiembre de 2009

El plásmido PUC

En muchas ocasiones los plásmidos bacterianos son utilizados como vectores, moléculas lanzadera que permiten clonar fragmentos de DNA de nuestro interés para poder transformar posteriormente células. Hay muchos plásmidos disponibles, pero este posee una peculiaridad que lo hace un poco más especial que los demás.

image Es un plásmido pequeño que contiene un origen autónomo de replicación además de un gen de resistencia a la ampicilina. Hasta aquí todo normal, la mayoría de plásmidos poseen estas dos características.

Lo particular es que esta plásmido conserva el gen LacZ (que codifica para la beta galactosidasa) y que además dentro del gen se ha incorporado un fragmento que contiene secuencias de restricción (polilinker) pero que no afecta a la pauta de lectura de manera que si el gen se traduce da lugar a una beta galactosidasa funcional. No obstante cuando se inserta el DNA el gen de la betagalactosidasa no es capaz de traducirse.

La combinación del gen LacZ con el polilinker y el gen de resistencia a la Amp permite por un lado diferenciar entre las células que han incorporado el plásmido o no (ya que sólo las que lo hayan incorporado crecerán en presencia de Amp) pero dentro de estas permite distinguir entre las que incorporan el inserto y las que no ya que si se pone un análogo cromogénico de la galactosa (sustrato de la betagalactosidasa) como es X-Gal las colonias que NO hayan incorporado el inserto serán capaces de producir betagalactosidasa y por tanto romper el X-Gal dando lugar a colonias de color azul, mientras que las que hayan incorporado el inserto permanecerán blancas con el X-Gal porque no serán capaces de romper el X-Gal.

1 comentario :

Alejandra Dip dijo...

Gracias che! está re bien explicado, me ayudas con mi examen de biología molecular :)